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千錘百煉出深?，反復(fù)試驗鑄精品！瑞奇公司在產(chǎn)品上市前不斷地做各種不同的試驗、實驗、以求來驗證產(chǎn)品的穩(wěn)定性。

我今天用瑞奇科技的CELLImage Nano活細(xì)胞成像儀來做B16細(xì)胞培養(yǎng)實驗，并運用其Readcells軟件進(jìn)行細(xì)胞全過 程監(jiān)測，現(xiàn)我分享如下：

B16細(xì)胞背景概述

B16是小鼠黒色素瘤細(xì)胞（簡稱B16細(xì)胞），1954年建立，來源于C57BL/6小鼠的黒色素瘤上皮細(xì)胞， 廣泛應(yīng)用于癌癥相關(guān)研究。通過利?B16 細(xì)胞可分泌??素， 常?在??素瘤相關(guān)研究上，將B16細(xì)胞作為研究模型，研究?員能夠更深?地了解癌細(xì)胞擴散和在不同?體器官增殖的機制。

惡性黒素瘤（malignant melanoma）是由皮膚和其他器官黒素細(xì)胞產(chǎn)生的腫瘤。?膚?素瘤表現(xiàn)為? 素性?損在數(shù)?或數(shù)年中發(fā)?明顯改變。雖其發(fā)病率 低，但其惡性度?，轉(zhuǎn)移發(fā)?早，死亡率?，因此早 期診斷、早期治療很重要。

本?將介紹B16細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)，包括培養(yǎng)基的選擇、細(xì)胞的傳代、細(xì)胞的凍存和解凍等??，以便科 研?作者更好地利?B16細(xì)胞開展相關(guān)研究。

B16細(xì)胞介紹

圖?來?瑞奇科技實驗室

1、來源：????素瘤；

2、形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣，貼壁??；

3、 傳代?例：1:2 ~ 1:4；

4、換液頻率：2~3次/周；

5、倍增時間：48~72h;

6 、 培 養(yǎng) 體 系 ： DMEM （ 高 糖 ）+10%FBS+1%P/S;

7、培養(yǎng)條件：5%CO2;37°C。

B16細(xì)胞培養(yǎng)建議

圖?來?瑞奇科技實驗室

PART/01、細(xì)胞培養(yǎng)特點

1、貼壁性?般， 消化時間較短， ?分鐘左右，注意控制消化時間。

2、細(xì)胞??較快， 注意控制細(xì)胞密度不要過?， 細(xì)胞密度過?則會影響細(xì)胞狀態(tài)， 未及時傳代或者換液會出現(xiàn)細(xì)胞脫落或狀態(tài)變差。

3、細(xì)胞傳代的融合度達(dá)到80%（ 就可以進(jìn)?傳代， 傳代時切勿暴?吹打， 避免機械損傷。以下是15%、40%、80%融合度分析圖與原圖的對?。

PART/02、細(xì)胞培養(yǎng)注意事項

1、B16細(xì)胞推薦的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是DMEM（?糖） 培養(yǎng)基。DMEM養(yǎng)B16 ， 細(xì)胞會很?， 分泌??素量?較多（ 下圖左管）?；?1640養(yǎng)?較?，??素分泌量?較少（ 下圖右管）。（ 依據(jù)實驗需求可嘗試更換培養(yǎng)體系， 更換時建議留種）。

2、B16細(xì)胞在DMEM(含1.5g/L NaHCO3)培養(yǎng)基中??良好， 市?上?部分的DMEM 含 有 較 ? 濃 度 的 NaHCO₃（ 3.7g/L ） ， 若 使 ? DMEM（ 3.7g/LNaHCO₃ ） 培養(yǎng)基?培養(yǎng)細(xì)胞時則需提?CO₂濃度（7%-10%）。

3、更換為DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)時， 請保證?清和培養(yǎng)液質(zhì)量， 不然營養(yǎng)問題會導(dǎo)致細(xì)胞不?、?緩慢以及??素?量分泌。

PART/03、細(xì)胞培養(yǎng)過程呈現(xiàn)出的特征

1、B16細(xì)胞以梭形或者多邊形細(xì)胞為主，具有較???速度， 表現(xiàn)出較?增殖能?。

2、細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的??素顆粒呈現(xiàn)出棕??， 使該細(xì)胞在觀察時更加醒?， 便于觀 察， 同時??素顆?？梢源龠M(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲，因此B16細(xì)胞具有強?的侵襲遷移能?和抗凋亡能?。

3、B16細(xì)胞是?種本???較快的細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)?細(xì)胞80~90%的融合度，即可進(jìn)?分瓶處理，?般T25培養(yǎng)瓶建議1:4 傳代，每周可傳代2~3次。

4、B16細(xì)胞在復(fù)蘇、傳代后，如果細(xì)胞出現(xiàn)?些漂浮狀態(tài)和細(xì)胞碎?， 可能是由于細(xì)胞狀態(tài)不佳導(dǎo)致， 可以通過換液得到?式去除細(xì)胞碎?及漂浮的細(xì)胞。

5、B16細(xì)胞密度低時，生?緩慢，接種密度建議啟動接種密度：1.0x10 5至5x10 5 活細(xì)胞/ml 為宜， 繼代培養(yǎng)的接種密度：5.0x10⁴至3.0x10 ⁵活細(xì)胞/ml。