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新聞資訊
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不同培養(yǎng)體系下人神經母細胞瘤細胞的形態(tài)連續(xù)監(jiān)測及分析
實驗介紹：
為了驗證不同營養(yǎng)體系培養(yǎng)的SH-SY5Y細胞形態(tài)的差異，并篩選出合適的培養(yǎng)體系。我們設計了兩組實驗，通過CELLImage Mini全自動活細胞成像儀動態(tài)監(jiān)測實驗過程對比兩種營養(yǎng)體系培養(yǎng)的SH-SY5Y細胞形態(tài)。體系1是DMEM+10%FBS+1%雙抗培養(yǎng)基，體系2是DMEM/F12+ 10%FBS+1%雙抗培養(yǎng)基。
實驗時間：2025年06月20日 14：10-15：13
實驗設備及廠家：CELLImage Mini全自動活細胞成像儀（聯慶瑞奇）、離心機（國產）、恒溫水浴鍋（國產）
實驗耗材及廠家：六孔板（國產）
實驗試劑：DMEM培養(yǎng)基（逸漠生物）、DMEM/F12培養(yǎng)基（逸漠生物）、胎牛血清（逸漠生物）、青鏈霉素溶液（逸漠生物）、胰蛋白酶（逸漠生物）
細胞類型：SH-SY5Y（逸漠生物）
實驗步驟：
（1）觀察細胞：將兩種培養(yǎng)體系下的細胞分別放置于CELLImage Mini全自動活細胞成像儀觀察細胞的狀態(tài)及密度，細胞融合度達到 70%-90%即可進行傳代。
（2）收集細胞：將細胞原有培養(yǎng)液分別收集于15ml離心管，用 1×PBS洗滌細胞兩次，加入適量胰酶溶液，室溫消化0.5-1min，細胞明顯脫離立即終止消化。
（3）離心重懸：將細胞于1000rpm離心5min后，加入對應培養(yǎng)基進行重懸。
（4）細胞鋪板：將細胞分別按照1:2的比例分別傳代鋪板至六孔板中，加入對應的培養(yǎng)基，做好標記。
（5）細胞培養(yǎng)監(jiān)測：在將細胞培養(yǎng)板放置于37°C、5%CO2 飽和濕度培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，用CELLImage Mini全自動活細胞成像儀對細胞每間隔60min進行一次優(yōu)化對焦圖像采集，持續(xù)監(jiān)測細胞直至下一次傳代。
實驗結果及分析：
（1）通過CELLImage Mini全自動活細胞成像儀連續(xù)監(jiān)測，分別對兩種體系下培養(yǎng)的SH-SY5Y第2天和第4天相應的形態(tài)觀察。傳代第2天，低密度下，兩種營養(yǎng)體系培養(yǎng)的SH-SY5Y形態(tài)沒有明顯差異，均為少數懸浮，多數呈上皮樣，有短觸角延伸出來，傾向于聚團生長；傳代第4天，體系1培養(yǎng)的SH-SY5Y細胞輪廓較為纖細，出現部分細胞調亡，細胞沒有很明顯聚團現象，體系2培養(yǎng)的SH-SY5Y細胞部分聚團（符合SH-SY5Y本身有聚團生長特性），細胞形態(tài)正常。根據形態(tài)學監(jiān)測結果來看，DMEM/F12 + 10%FBS+1%雙抗培養(yǎng)基更適合培養(yǎng)SH-SY5Y。（如下圖所示）
體系1是DMEM+10%FBS+1%雙抗培養(yǎng)基，體系2是DMEM/F12+ 10%FBS+1%雙抗培養(yǎng)基
（2）通過Readcels分析軟件對兩個培養(yǎng)體系下的SH-SY5Y連續(xù)監(jiān)測圖像進行分組分析生成生長曲線，并通過其計數功能對細胞計數結果綜合分析。根據融合率分析合成的生長曲線發(fā)現培養(yǎng)體系1比培養(yǎng)體系2融合度更高，但是細胞計數培養(yǎng)體系2培養(yǎng)細胞數量高于培養(yǎng)體系1。因此培養(yǎng)體系2培養(yǎng)的SH-SY5Y更符合其喜歡聚團生長，鏡下觀察融合率不高，細胞簇實際密度大的特性。
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兩種培養(yǎng)體系生長曲線圖
兩種培養(yǎng)體系細胞數量柱狀圖
實驗總結：
CELLImage Mini全自動活細胞成像儀不僅能夠動態(tài)監(jiān)測細胞實驗全程的生長變化信息，揭示細胞殺傷、分裂、遷移等生命活動的細微變化過程，記錄實驗過程中關鍵信息，實現動態(tài)研究調控物質對細胞的影響；而且支持紅綠藍三通道熒光拍攝，對于一些穩(wěn)轉細胞株構建、監(jiān)測細胞熒光表達、凋亡監(jiān)測、熒光染料染色實驗幫助極大?；罴毎麆討B(tài)監(jiān)測技術實驗全程不耗費人力，所有細胞圖像的拍攝記錄都可以由設備獨立完成，實現全自動，高通量，長期穩(wěn)定性和低干擾的結合。
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