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人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞簡介及生長實(shí)驗(yàn)
Sh-sy5y細(xì)胞背景介紹：
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞是來源于兒童常見惡性腫瘤——神經(jīng)母細(xì)胞瘤的惡性細(xì)胞。它們起源于胚胎期神經(jīng)嵴前體細(xì)胞的分化障礙，具有高度異質(zhì)性、未分化特性和獨(dú)特的分子特征（如MYCN擴(kuò)增）。其臨床行為差異巨大，從高度侵襲轉(zhuǎn)移到自發(fā)消退均可能發(fā)生，是兒童癌癥研究和治療的重要對(duì)象。SH-SY5Y細(xì)胞是SK-N-SH細(xì)胞系經(jīng)3次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)，母株SK-N-SH細(xì)胞是1970年來源于4歲女性患者骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細(xì)胞瘤。SH-SY5Y細(xì)胞具有中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性，細(xì)胞生長飽和密度大于1×10^6/cm^2。SH-SY5Y細(xì)胞可以用于3D細(xì)胞培養(yǎng)、高通量篩選、免疫學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、毒理學(xué)研究，也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。
Sh-sy5y細(xì)胞信息簡介：
中文名稱 ：人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞。
細(xì)胞簡稱 ：Sh-sy5y。
細(xì)胞形態(tài) ：上皮細(xì)胞樣。
生長特性 ：多數(shù)貼壁、少數(shù)懸浮。
傳代比例：1:2~1:4。
換液頻率：1~2次/周。
培養(yǎng)環(huán)境 ：5%CO2 在37℃培養(yǎng)。
凍存條件 ：無血清凍存液 凍存于液氮。
完全培養(yǎng)基 ：43%MEM＋+43%F12+10% FBS＋1% P /S+1%丙酮酸鈉+1%GlutaMAX+1%MEM NEAA（非必需氨基酸）。
Sh-sy5y細(xì)胞特點(diǎn)：
（1）該細(xì)胞生長特性為多數(shù)貼壁，少數(shù)懸浮；
（2）喜歡聚團(tuán)生長，CELLImage Mini全自動(dòng)活細(xì)胞成像儀觀察Sh-sy5y細(xì)胞簇如下圖；
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（3）細(xì)胞增殖緩慢，且喜歡聚團(tuán)生長，鏡下觀察融合率較低，需要5-7天才能達(dá)到80%以上的融合率；如果細(xì)胞培養(yǎng)一周都無法傳代，建議把細(xì)胞消化下來，接種到更小的孔板中，增加細(xì)胞密度，促進(jìn)細(xì)胞生長。
Sh-sy5y細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)：
實(shí)驗(yàn)時(shí)間：2025年06月13日 14：10-15：13。
實(shí)驗(yàn)設(shè)備及廠家：CELLImage Mini全自動(dòng)活細(xì)胞成像儀（聯(lián)慶瑞奇）、離心機(jī)（國產(chǎn)）、恒溫水浴鍋（國產(chǎn)）。
實(shí)驗(yàn)耗材及廠家：六孔板（國產(chǎn)）
實(shí)驗(yàn)試劑：培養(yǎng)基（逸漠生物）、胎牛血清（逸漠生物）、青鏈霉素溶液（逸漠生物）、胰蛋白酶（逸漠生物）。
細(xì)胞類型：Sh-sy5y（逸漠生物）。
Sh-sy5y傳代步驟：
（1）實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：將配好的Sh-sy5y培養(yǎng)基和胰蛋白酶從2-8℃ 中取出放置到水浴箱預(yù)熱 30 min 左右。并對(duì)生物安全柜紫外照射消殺30min；
（2）觀察細(xì)胞：將細(xì)胞放置于CELLImage Mini全自動(dòng)活細(xì)胞成像儀觀察細(xì)胞的狀態(tài)及密度，細(xì)胞融合度達(dá)到 70%-90%即可進(jìn)行傳代（如下圖所示）；
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（3）洗滌細(xì)胞：將六孔板里的原有培養(yǎng)液收集于15ml離心管，用 1×PBS洗滌細(xì)胞兩次，去除殘余的培養(yǎng)液和血清；
（4）消化細(xì)胞：每孔加入100ul胰酶溶液，室溫消化0.5-1min，輕輕拍打六孔板兩側(cè)會(huì)有細(xì)胞明顯脫離，立即終止消化；
（5）終止消化：加入2ml完全培養(yǎng)液終止消化，吹打六孔板底 2-3 次使所有細(xì)胞徹底脫壁。將細(xì)胞懸浮液到 15 mL 離心管中，做好標(biāo)記；
（6）細(xì)胞離心：在室溫條件下，將細(xì)胞于1000rpm離心5min；
（7）細(xì)胞重懸：離心后，在生物安全柜內(nèi)小心倒去上清，用吸管吸取2 mL新鮮完全培養(yǎng)液重懸細(xì)胞至單細(xì)胞懸液；
（8）細(xì)胞計(jì)數(shù)：取少量單細(xì)胞懸液進(jìn)行臺(tái)盼藍(lán)染色，于CELLImage Mini全自動(dòng)活細(xì)胞成像儀進(jìn)行拍照計(jì)數(shù)；
（9）細(xì)胞傳代：根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果，將Sh-sy5y細(xì)胞傳入六孔板中，每孔補(bǔ)足2ml完全培養(yǎng)基；
（10）細(xì)胞培養(yǎng)及監(jiān)測：在六孔板對(duì)應(yīng)孔寫上細(xì)胞名稱、復(fù)蘇日期，放置37°C、5%CO2 飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。用CELLImage Mini全自動(dòng)活細(xì)胞成像儀對(duì)細(xì)胞每間隔60min進(jìn)行一次圖像采集，持續(xù)監(jiān)測細(xì)胞直至下一次傳代。
下圖依次是1h/12h/24h/36h/48h/60h/72h連續(xù)性圖像及生長曲線
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實(shí)驗(yàn)總結(jié)：
CELLImage Mini全自動(dòng)活細(xì)胞成像儀不僅能夠動(dòng)態(tài)監(jiān)測細(xì)胞實(shí)驗(yàn)全程的生長變化信息，揭示細(xì)胞殺傷、分裂、遷移等生命活動(dòng)的細(xì)微變化過程，記錄實(shí)驗(yàn)過程中關(guān)鍵信息，實(shí)現(xiàn)動(dòng)態(tài)研究調(diào)控物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的影響；而且支持紅綠藍(lán)三通道熒光拍攝，對(duì)于一些穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建、監(jiān)測細(xì)胞熒光表達(dá)、凋亡監(jiān)測、熒光染料染色實(shí)驗(yàn)幫助極大?；罴?xì)胞動(dòng)態(tài)監(jiān)測技術(shù)實(shí)驗(yàn)全程不耗費(fèi)人力，所有細(xì)胞圖像的拍攝記錄都可以由設(shè)備獨(dú)立完成，實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)，高通量，長期穩(wěn)定性和低干擾的結(jié)合。
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